Mélanger et verser le milieu gélose

La création et le versement du milieu gélose constituent une étape cruciale en microbiologie et en mycologie pour la culture de divers champignons, notamment les champignons. Voici un guide étape par étape sur la façon de mélanger et de créer du milieu gélose, puis de le verser dans des boîtes de Pétri :

Les matériaux nécessaires:

• Poudre d'agar (par exemple, gélose à l'extrait de malt, gélose au dextrose de pomme de terre)
• Eau distillée
• Récipient ou bécher en verre
• Tige d'agitation ou barreau d'agitation magnétique
• pH-mètre ou bandelettes de pH
• Balance
• Autoclave ou autocuiseur
• Boîtes de Pétri stériles avec couvercles
• Sacs ou conteneurs de stérilisation
• Matériel de stérilisation (autocuiseur ou autoclave)
• Gants stériles
• Environnement de travail stérile (par exemple, hotte à flux laminaire ou boîte à gants)

Procédure:

Mesurer la poudre d'agar :

• Pesez la quantité appropriée de poudre d'agar en fonction de votre recette. Un ratio courant est d’environ 20 à 25 grammes de poudre d’agar par litre d’eau distillée. Ajustez en fonction de vos besoins spécifiques.

Mesurer l'eau distillée :

• Mesurez le volume requis d'eau distillée, généralement 1 litre par lot, dans un récipient en verre ou un bécher.

Mélanger la gélose et l'eau :

• Saupoudrez lentement la poudre d'agar dans l'eau distillée tout en remuant continuellement. Cela aide à prévenir l’agglutination. Utilisez un agitateur ou un barreau magnétique pour un mélange uniforme.

Ajuster le pH (si nécessaire) :

• Certaines recettes peuvent nécessiter un ajustement du pH du milieu gélose. Utilisez un pH-mètre ou des bandelettes de pH pour mesurer le niveau de pH et effectuer les ajustements nécessaires. Les niveaux de pH courants pour le milieu gélose varient entre 5,6 et 6,5.

Chauffer et stériliser :

• Versez le mélange d'agar dans des sacs ou des récipients de stérilisation, en laissant un peu d'espace pour l'expansion de la vapeur. Scellez-les sans serrer. Placer les sacs ou récipients dans un autoclave ou une cocotte minute.

Stériliser:

• Stérilisez le milieu gélose à 15 psi (livres par pouce carré) pendant environ 15 à 20 minutes. Le temps et la pression exacts peuvent varier en fonction de votre recette et de votre équipement spécifiques.

Refroidir et solidifier :

• Après stérilisation, retirez délicatement le milieu gélosé de l’autoclave ou de l’autocuiseur. Laissez-le refroidir à environ 45-50°C (113-122°F). Il doit rester sous forme liquide à cette température.

Verser dans des boîtes de Pétri :

• Dans un environnement stérile comme une hotte à flux laminaire ou une boîte à gants, versez la gélose encore liquide dans des boîtes de Pétri stériles. Remplissez les plats à une profondeur appropriée, généralement autour de 1/4 de pouce. Scellez immédiatement les boîtes de Pétri pour éviter toute contamination.

Laisser solidifier :

• Laissez la gélose se solidifier à température ambiante. Cela prend généralement environ 20 à 30 minutes.

Stocker ou utiliser :

• Une fois solidifiées, vous pouvez conserver les plaques de gélose dans un endroit frais ou au réfrigérateur jusqu'à ce que vous soyez prêt à les utiliser pour des cultures microbiennes ou fongiques.

La création et le versement du milieu gélose sont un processus précis qui nécessite des conditions stériles et une attention particulière aux mesures et à la stérilisation. Différents organismes peuvent avoir des exigences spécifiques, alors assurez-vous de suivre les directives appropriées à votre application.